| 无小鼠神经毒力的乙型脑炎病毒/登革病毒1型嵌合病毒的筛选与序列分析 |
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| 引用本文： | 何婷 范凤鸣 牟建超 杨欢 刘莉娜 刘俐 汪伟 曾献武 杨会强. 无小鼠神经毒力的乙型脑炎病毒/登革病毒1型嵌合病毒的筛选与序列分析[J]. 国际生物制品学杂志, 2018, 41(4): 157-161. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2018.04.001 |
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| 作者姓名： | 何婷 范凤鸣 牟建超 杨欢 刘莉娜 刘俐 汪伟 曾献武 杨会强 |
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| 作者单位： | 610023 成都生物制品研究所有限责任公司病毒疫苗研究室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划（863计划）（2012AA02A401） |
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| 摘 要： | 目的 采用蚀斑纯化法筛选对小鼠无神经毒力的乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）/登革病毒（dengue virus，DENV）1型嵌合病毒（JD1）纯化株，分析影响JD1小鼠神经毒力的相关位点。方法 将JD1在乳地鼠肾细胞中进行3轮蚀斑纯化，检测JD1纯化株对小鼠的脑内神经毒力。然后提取无神经毒力纯化株的基因组RNA，用逆转录PCR分段扩增全基因组序列并进行序列测定。将测序结果分别与原DENV-1 的前膜-包膜蛋白和JEV骨架病毒株SA-14-14-2的基因序列进行比对。选取2个无神经毒力纯化株进行小鼠免疫保护实验。采用单侧t检验对结果进行比较。结果 经过3轮蚀斑纯化后，获得大、中、小3种蚀斑形态的6个JD1纯化株。3个纯化株对小鼠无神经毒力，小鼠脑内注射后全部存活；1株神经毒力较弱，70%以上小鼠存活；2株具有强神经毒力，小鼠全部死亡。测序结果显示，对小鼠无神经毒力的3个纯化株存在2处相同的氨基酸突变。将其中2个纯化株JD1-PP-61和JD1-PP-31腹腔免疫小鼠后，再用1 000半数致死量DENV-1鼠脑适应株进行脑内攻击。JD1-PP-61能较好地保护小鼠抵抗病毒攻击，仅20.0%小鼠死亡（t=7.237，P<0.001）；JD1-PP-31保护效果稍弱，41.9 %小鼠死亡（t=4.752，P<0.01）。结论 通过蚀斑纯化筛选出对小鼠无神经毒力的JD1纯化株，并发现了可能与神经毒力减弱相关的位点。
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| 关 键 词： | 登革热病毒 脑炎病毒 日本 疫苗 减毒 蚀斑纯化 神经毒力 |
Screening and sequence analysis of Japanese encephalitis virus/dengue virus type 1 chimeric virus without neurovirulence in mice |
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| Affiliation: | Viral Vaccine Research Laboratory, Chengdu Institute of Biological Products Co., Ltd., Chengdu 610023, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Dengue virus Encephalitis virus Japanese Vaccines attenuated Plaque purification Neurotoxicity |
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