伤寒沙门菌非编码RNA AsfD的分子鉴定及表达特性

［摘要］目的: 对伤寒沙门菌flhDC基因对侧编码的疑似非编码RNA AsfD进行分子鉴定及表达特性分析。方法: 在AsfD已知序列区设计特异性引物，体外转录制备RNA探针，通过RNA印迹检测伤寒沙门菌AsfD的表达；使用cDNA末端快速扩增(5′rapid amplification of cDNA ends，RACE)和RT-PCR分析AsfD的转录起始位点和终止区域；用qRT-PCR检测AsfD在伤寒沙门菌不同生长时相和环境应激下的表达特性。结果： RNA印迹结果表明，伤寒沙门菌中确实存在AsfD表达，长度在2 300 nt左右；5′RACE分析表明，AsfD转录起始点位于flhC基因终止密码子下游590 bp；RT-PCR结果表明其转录终止区域位于flhD基因起始密码子上游558～788 bp之间；序列分析显示AsfD全区域没有明显的ORF结构；qRT-PCR结果显示，AsfD在伤寒沙门菌生长的稳态期表达较高，酸、氧和高渗环境应激后均明显下降(P<0.01)。 结论： AsfD为伤寒沙门菌一长链非编码RNA，在不同时相和应激条件下存在表达调节。

Identification of non-coding RNA AsfD in Salmonella entericaserovar Typhi and its expressional characteristics