腺相关病毒介导的仓鼠δ-SG基因在TO-2型仓鼠骨髓间充干细胞的表达

目的构建含有δ-SG基因的腺相关病毒载体并检测经腺相关病毒介导基因转染的TO-2型仓鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中目的基因的表达。方法用EcoRI酶和XhoI酶酶切含有δ-SG基因的pUC57-SG质粒,获得δ-SG基因。片段回收后定向插入腺相关病毒载体质粒pITR-GFP中重组成pITR-GFP-SG,并同pXX680、pHelper三质粒经钙磷沉淀法共转染HEK293细胞,斑点杂交法测定重组病毒颗粒滴度,再将重组病毒颗粒转染TO-2型仓鼠的MSCs,利用RT-PCR法,免疫荧光检测目的基因的表达,MTT检测转染细胞增殖能力。结果成功构建了δ-SG基因的腺相关病毒载体。含δ-SG基因的腺相关病毒感染TO-2型仓鼠MSCs48h后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳出现884bp-DNA片段;免疫荧光检测显示TO-2型仓鼠MSCs中呈现绿色颗粒,大小深浅不一;MTT证实转染后细胞的增殖能力未受明显影响。结论采用腺相关病毒介导的方法,可以将δ-SG基因导入TO-2型仓鼠的MSCs并成功表达。