| 重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano在肌源性细胞C2C12中的表达 |
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| 引用本文： | 王志广,桂鸣,蒋莉,陈秀英,黄峻,陈琪,范乐明. 重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano在肌源性细胞C2C12中的表达[J]. 中国动脉硬化杂志, 2005, 13(2): 146-150 |
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| 作者姓名： | 王志广 桂鸣 蒋莉 陈秀英 黄峻 陈琪 范乐明 |
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| 作者单位： | 1. 南京医科大学动脉粥样硬化研究中心,江苏省南京市,210029
2. 江苏省人民医院心内科,江苏省南京市,210029 |
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| 基金项目： | 江苏省教育厅自然科学基金(00KJB31006)、江苏省普通高校自然科学研究计划(01KJB32003)和南京医科大学科技创新基金(CX003001)资助 |
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| 摘 要： | 目的以重组2型腺相关病毒为载体介导人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠ Milano在小鼠肌源性细胞C2C12中的表达,探索一种崭新的预防、治疗动脉粥样硬化性疾病的途径.方法以正常人肝组织中抽提的RNA为模板,用逆转录聚合酶链反应获得人载脂蛋白AⅠ cDNA,点突变制备载脂蛋白AⅠ Mihno cDNA.分别将载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白AⅠ Milano的cDNA插入重组2型腺相关病毒载体质粒,并与辅助质粒共转染包装细胞293T获得编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠ Milano的重组腺相关病毒载体,粗提后以冰乙醇法进行浓缩.斑点杂交检测重组2型腺相关病毒载体滴度,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度.分别用含载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠ MihnocDNA的编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠ Milano的重组腺相关病毒对小鼠肌源性细胞C2C12进行感染,酶联免疫吸附法检测蛋白表达情况.结果聚合酶链反应产物序列正确,点突变成功.编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠ Milano的重组腺相关病毒的滴度均在2×1014个/L左右.重组2型腺相关病毒纯度良好.载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠ Milano分别获得0.39±0.04 mg/L和0.31±0.03mg/L的表达水平.结论成功制备表达载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠ Mfiano的重组腺相关病毒载体,并在C2C12细胞中获得有效表达,为进一步探索方便、安全的预防和治疗动脉粥样硬化性疾病的方法打下了基础.
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| 关 键 词： | 细胞生物学 动脉粥样硬化基因治疗 基因转移 腺相关病毒 载脂蛋白AⅠ 载脂蛋白AⅠMilano 肌源性细胞 |
| 文章编号： | 1007-3949(2005)13-02-0146-05 |
| 收稿时间： | 2004-10-22 |
| 修稿时间： | 2004-10-22 |
Recombinant Adeno-Associated Viruses Mediated Apolipoprotein A1 and Apolipoprotein A1 Milano Expression in Myogenic C2C12 Cells |
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| WANG Zhi-Guang,GUI Ming,JIANG Li,CHEN Xiu-Ying,HUANG Jun,CHEN Qi,and FAN Le-Ming. Recombinant Adeno-Associated Viruses Mediated Apolipoprotein A1 and Apolipoprotein A1 Milano Expression in Myogenic C2C12 Cells[J]. Chinese Journal of Arteriosclerosis, 2005, 13(2): 146-150 |
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| Authors: | WANG Zhi-Guang GUI Ming JIANG Li CHEN Xiu-Ying HUANG Jun CHEN Qi and FAN Le-Ming |
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| Affiliation: | WANG Zhi-Guang1,GUI Ming2,JIANG Li1,CHEN Xiu-Ying1,HUANG Jun2,CHEN Qi1,and FAN Le-Ming1 |
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| Abstract: | |
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