| 人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析 |
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| 引用本文： | 付琛颖,曲戎梅,邱国真,魏威,林志斌,王萍,王文敬,李珍,董文其.人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析[J].热带医学杂志,2009,9(4). |
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| 作者姓名： | 付琛颖 曲戎梅 邱国真 魏威 林志斌 王萍 王文敬 李珍 董文其 |
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| 作者单位： | 南方医科大学生物技术学院生物制药系,广州,510515 |
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| 基金项目： | 广州市科技计划资助项目(No.2008Z1-E391) |
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| 摘 要： | 目的通过基因重组的方法表达IgE Cε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的相互作用,并用重组蛋白免疫小鼠制备血清。方法用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgE Cε3-Cε4cDNA片段,克隆至pET28a(+)构建原核表达载体IgE Cε3-Cε4-pET28a(+),将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达IgE Cε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的结合能力,并用UniCAP 100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定;用表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗鼠血清,用Western-blot法对多克隆抗体进行鉴定。结果成功调取的人IgE Cε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgECε3-Cε4区蛋白相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致;IgE Cε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE。结论成功构建了IgE C...
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| 关 键 词： | IgE Cε3-Cε4 表达 鉴定 |
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