| Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 刘小林,段秀梅,方艳秋,谭岩,史宏博,车媛媛,刘力华.Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定[J].吉林大学学报(医学版),2007,33(2):381-384. |
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| 作者姓名： | 刘小林 段秀梅 方艳秋 谭岩 史宏博 车媛媛 刘力华 |
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| 作者单位： | 吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021 |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅科研项目
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吉林省杰出青年资助基金
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吉林省长春市科技发展计划项目 |
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| 摘 要： | 目的：获得人Flt3配体(FL) cDNA胞外段序列，构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法：提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列，构建重组质粒pGEM-FL，经酶切、PCR和测序鉴定后，将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30，构建重组表达质粒PQE30-rhFL，在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层
析方法纯化目的蛋白，Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白，并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果：经测序证实，获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol?L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25 000的蛋白，镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25 000处可见特异性着色带。结论：构建了原核表达载体PQE30-rhFL，并成功诱导了rhFL蛋白的表达，通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。
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| 关 键 词： | 配体 原核表达 巢式聚合酶链反应 遗传载体/分离与提纯 |
| 文章编号： | 1671-587X(2007)02-0381-04 |
| 收稿时间： | 2006-06-20 |
| 修稿时间： | 2006年6月20日 |
Construction, expression and purfication of prokaryotic expression plasmid of Fit3 ligand gene and identification of its biological activity |
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| Abstract: | |
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