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| NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建 | |
| 引用本文： | 刘百峰,张涛,袁文,吕碧涛,徐盛明,何成.NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建[J].中国组织工程研究与临床康复,2006,10(42):104-106. |
| 作者姓名： | 刘百峰 张涛 袁文 吕碧涛 徐盛明 何成 |
| 作者单位： | 1. 解放军第二军医大学长征医院骨科,上海市,200003 2. 上海第六医院骨科,上海市,200003 3. 解放军第二军医大学神经生物教研室,上海市,200433 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助(30471757)3，长江学者和创新团队发展计划资助(PCSIRT)3，上海市卫生局医学领军人才课题资助~~ |
| 摘 要： | 目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体。方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004-03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHI、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果:①4对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高,转染72h效果最显著(96.04%)。NgR特异性siRNA199序列为:5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siR-NA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgRmRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 质粒ZRNA 小分子干扰 核酸类 核苷酸类和核苷类 脊髓损伤 |
| 文章编号： | 1671-5926(2006)42-0104-03 |
| 修稿时间： | 2006年6月29日 |
Establishment of an expression vector of NgR-specific siRNA |
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| Liu Bai-feng,Zhang Tao,Yuan Wen,Lü Bi-tao,Xu Sheng-ming,He Cheng.Establishment of an expression vector of NgR-specific siRNA[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2006,10(42):104-106. | |
| Authors: | Liu Bai-feng Zhang Tao Yuan Wen Lü Bi-tao Xu Sheng-ming He Cheng |
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