胰腺癌细胞株Pc-3、HS766T DPC4基因的表达检测及其对细胞增殖的影响初探

目的：了解Pc-3、HS766T两个胰腺癌细胞株DPC4基因的表达情况。方法：用Trizol试剂提取两个细胞株培养细胞的总RNA，用RT-PCR的方法合成DPC4的cDNA并经与标准cDNA电泳确认后，用Qiagen PCR纯外试剂盒纯化，将纯化的cDNA与克隆载体P1-Adv连接，并用连接产物转化大肠杆菌，扩增后提取质粒，经酶切鉴定后，送上海博亚公司测序，并上网与基因库中DPC4的cDNA比较，同时观察两个细胞株肿瘤细胞的生长情况。结果：HS766T细胞无DPC4基因表达(同源缺失)，Pc-3细胞存在DPC4基因表达，但其cDNA片段与理论值相比．短约200bp，上网BLAST的结果表明，在中间连接区，有一236bp的片段缺失。两个细胞生长观察表明，Pc-3细胞生长明显慢于HS766T。结论：胰腺癌细胞株HS766T中DPC4基因同源缺失，细胞具有生长快速的特点。胰腺癌细胞株Pc-3中有正常功能的DPC4表达．但该DPC4转录产物显示，在其连接区有-236bp的片段缺失。该片段缺失对DPC4功能的具体影响尚不明确。