| 乙型肝炎病毒全基因转染L02细胞模型的建立及其HLA-A,B,C和MHC Ⅰ类链相关基因A/B分子的表达 |
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| 引用本文： | 陈敏,彭明利,石庆凤,任红.乙型肝炎病毒全基因转染L02细胞模型的建立及其HLA-A,B,C和MHC Ⅰ类链相关基因A/B分子的表达[J].中华肝脏病杂志,2007,15(6):417-421. |
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| 作者姓名： | 陈敏 彭明利 石庆凤 任红 |
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| 作者单位： | 400010,重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部省部共建感染性疾病分子生物学重点实验室 |
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| 摘 要： | 目的 以双拷贝HBV全基因质粒pEcob6转染非癌性肝源细胞株L02细胞建立有HBV分泌的细胞转染模型,通过检测细胞表面HLA-A,B,C及MHC Ⅰ类链相关基因（MIC）A／B分子,分析HBV对肝细胞HLA-A,B,C和MICA／B表达的影响。方法 用EcoRⅠ酶切掉pEcob6的HBV基因并连接,构建无HBV基因的对照空质粒;用脂质体法以pEcob6或空质粒与pcDNA3．1-neo-共转染L02细胞株,筛选抗性细胞株并稳定传代;用Abbott EIA试剂和免疫荧光法检测细胞上清液和（或）细胞的HBsAg、HBcAg和HBeAg表达,实时荧光定量PCR检测HBV DNA含量;用流式细胞仪检测细胞表面HLA-A,B,C和MICA／B分子的表达,分析两种分子表达的变化。结果 经G418抗性克隆筛选,pEcob6稳定转染细胞株（L02-HBV）的上清液HBsAg和HBeAg可达24．78 （S／N）和4．117（S／N）,HBV DNA为9．67×10^4拷贝／ml;而对照空质粒转染细胞株（L02 mock）和L02的表达均为阴性。共聚焦显微镜观察,L02-HBV细胞内的HBsAg强表达于细胞质内,而HBcAg弱表达于胞核或胞质内。流式细胞检测结果显示,L02和L02-mock细胞有HLA-A,B, C的表达,基本无MICA／B的表达,L02-HBV细胞HLA-A,B,C和MICA／B的表达均增强,差歼有统计学意义（P〈0．05）。结论 以HBV全基因质粒转染L02细胞经筛选、克隆、传代,可获得有HBV相关抗原表达及HBV DNA分泌的细胞模型。HBV基因的转录或复制可增强肝细胞株L02的HLA-A-A,B,C及MICA／B的表达,可能与肝细胞的免疫损伤有关。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒 乙型 转染 HLA抗原 MHC Ⅰ类链相关基因 |
| 修稿时间： | 2007-02-16 |
Establishing a L02 cell model with whole HBV gene transfection and analyzing its expressions of HLA-A, B, C and MICA/B |
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| CHEN Min,PENG Ming-li,SHI Qing-feng,REN Hong.Establishing a L02 cell model with whole HBV gene transfection and analyzing its expressions of HLA-A, B, C and MICA/B[J].Chinese Journal of Hepatology,2007,15(6):417-421. |
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| Authors: | CHEN Min PENG Ming-li SHI Qing-feng REN Hong |
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| Institution: | Key Laboratory of Molecular Biology for Infectious Diseases, PRC Ministry of Education, Institute for Viral Hepatitis, Chongqing University of Medical Sciences, Chongqing 400010, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus Transfection HLA antigens MHC class-I chain-related genes |
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