低浓度β-淀粉样蛋白抑制小鼠视网膜色素上皮细胞P-糖蛋白的功能性表达

目的　探讨低浓度β淀粉样蛋白（ａｍｙｌｏｉｄβ-ｐｒｏｔｅｉｎ，Ａβ）对原代培养小鼠视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞Ｐ-糖蛋白（Ｐ-ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ-ｇｐ）表达和活性的影响。方法　应用０．３μｍｏｌ?Ｌ－１Ａβ１-４２处理ＲＰＥ细胞４ｈ、８ｈ、１２ｈ和２４ｈ后，采用实时定量ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｐ-ｇｐ在基因和蛋白水平的表达；分别在细胞培养液中加入孕烯醇酮Ｘ受体原形配体１６-α-氰基孕烯诺龙（ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ１６-ａｌｐｈａ-ｃａｒ-ｂｏｎｉｔｒｉｌｅ，ＰＣＮ）和Ｐ-ｇｐ特异性抑制剂ＰＳＣ８３３后，孵育罗丹明１２３，然后用流式细胞仪检测各组细胞内罗丹明１２３的荧光强度来验证Ａβ１-４２对ＲＰＥ细胞Ｐ-ｇｐ活性的影响。结果　Ａβ１-４２处理细胞４ｈ、８ｈ、１２ｈ和２４ｈ后ｍｄｒ１表达量分别减至空白对照组的（７１．２５±８．３５）％（Ｐ＞０．０５）、（６１．３８±７．３７）％（Ｐ＜０．０５）、（４７．５１±８．９７）％（Ｐ＜０．０１）和（４１．２３±９．０６）％（Ｐ＜０．０１）；Ｐ-ｇｐ表达量在４个时间点分别减至空白对照组的（８１．７１±５．２７）％（Ｐ＞０．０５）、（５３．６４±４．５８）％（Ｐ＜０．０５）、（５１．２９±６．０２）％（Ｐ＜０．０５）和（４９．８２±７．２４）％（Ｐ＜０．０５）。罗丹明１２３积蓄实验结果显示，应用ＰＣＮ后，细胞内罗丹明１２３的荧光强度随着时间延长而减少，而应用ＰＳＣ８３３后，细胞内罗丹明１２３的荧光强度随着时间延长而增加。结论　低浓度Ａβ１-４２处理小鼠ＲＰＥ细胞，可抑制Ｐ-ｇｐ的表达与活性。Ｐ-ｇｐ可能是干预早期年龄相关性黄斑变性中Ａβ清除的潜在靶点。