人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化

目的　研究人原代晶状体上皮细胞中，下调色素上皮衍生因子（ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ－ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ，ＰＥＤＦ）的表达对波形蛋白和αＢ－晶状体蛋白表达的影响。方法　取２０～３５岁青年人晶状体上皮细胞进行原代培养。构建三种短发卡ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ，ｓｈＲＮＡ）以特异性下调原代人晶状体上皮细胞中的ＰＥＤＦ基因ＲＮＡ表达水平。感染细胞后，用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ检测ＰＥＤＦ基因ｍＲＮＡ的表达水平，确定ＲＮＡ干扰效率。人原代晶状体上皮细胞ＰＥＤＦ基因ＲＮＡ干扰４８ｈ后，用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测其中波形蛋白以及αＢ－晶状体蛋白表达水平的变化，以ｓｈＲＮＡ－ｓｃｒａｍｂｌｅ组为阴性对照组。结果　人原代晶状体上皮细胞被成功分离培养，带有绿色荧光蛋白的表达ＰＥＤＦｓｈＲＮＡ的病毒载体对人原代晶状体上皮细胞的感染效率都在８０％左右。Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ结果显示ＰＥＤＦ基因ｍＲＮＡ的表达明显被三种ｓｈＲＮＡ下调。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示ＰＥＤＦ基因的表达下调引起了波形蛋白的表达下降（在三个实验组中分别下降了７２％、７９％和９３％）以及αＢ－晶状体蛋白的表达增加（在三个实验组中分别增加了２１９％、２０４％、９３％）。结论　人原代晶状体上皮细胞中ＰＥＤＦ基因下调可引起维持晶状体透明性的两种重要蛋白的改变，提示ＰＥＤＦ与白内障形成有一定的联系。