| shRNA表达载体的改建及鉴定 |
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| 引用本文： | 陈娴,谢渊,赵艳,周建奖.shRNA表达载体的改建及鉴定[J].基础医学与临床,2011,31(1). |
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| 作者姓名： | 陈娴 谢渊 赵艳 周建奖 |
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| 作者单位： | 贵阳医学院分子生物学重点实验室,贵阳医学院附属医院,贵州,贵阳,550004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30560038); 贵州省国际科技合作重点项目计划(黔科合外G字,700119) |
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| 摘 要： | 目的通过改建pSilencer3.1-H1载体快速有效筛选重组shRNA表达载体,并可使线性化载体环化,长期保存。方法制备含有单一限制性内切酶NotⅠ识别序列的双链DNA插入片段,与BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的shRNA表达载体pSilencer3.1-H1连接,构建载体pSilencer3.1-H1/NotⅠ,再用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pSilenc-er3.1-H1/NotⅠ,将含靶向目的基因JAK2siRNA表达框的DNA模板与其连接,构建pSilencer3.1-H1/JAK2的shRNA表达载体,提取质粒DNA,用NotⅠ进行单酶切,快速选择阳性克隆,选取不能被NotⅠ切开的质粒进行测序鉴定。随后将pSilencer3.1-H1/JAK2转染胃癌细胞系,用Western blot检测JAK2蛋白的表达。结果通过测序证实pSilencer3.1-H1/NotⅠ和含JAK2siRNA表达框的表达载体成功构建,将其转染胃癌细胞系AGS后,抑制了JAK2蛋白的表达。结论通过对pSilencer3.1-H1表达载体的改建可以快速有效地筛选shRNA表达载体。
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| 关 键 词： | RNA干扰 小发卡RNA 基因沉默 表达载体 |
Reconstruction and identification of small hairpin RNA expression vector |
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| CHEN Xian,XIE Yuan,ZHAO Yan,ZHOU Jian-jiang.Reconstruction and identification of small hairpin RNA expression vector[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2011,31(1). |
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| Authors: | CHEN Xian XIE Yuan ZHAO Yan ZHOU Jian-jiang |
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| Institution: | CHEN Xian,XIE Yuan,ZHAO Yan,ZHOU Jian-jiang(Molecular Biology Key Laboratory and the Affiliated Hospital,Guiyang Medical College,Guiyang 550004,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interfere small hairpin RNA gene silence expression vector |
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