小鼠白蛋白基因启动子的克隆及其在不同细胞系中转录活性的检测

目的：对比小鼠白蛋白（mouse albumin promoter, ALB）启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）在不同细胞系中的转录活性。方法：以小鼠全血基因组DNA为模板，聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增ALB启动子序列，克隆至pEGFP-1中，构建重组体pALB-EGFP；在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3；荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果：pALB-EGFP构建成功；L02转染pALB-EGFP 72 h后，ALB启动子可起始EGFP的表达，转录活性为人巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）启动子的1/4，其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录；稳定筛选后，ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论：构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性, 为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。