| 大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究 |
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| 引用本文： | 张红梅,乐晓华,徐六妹,李丽雄,王火生,周伯平,陈玉丙.大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究[J].中国实验诊断学,2008,12(1):38-41. |
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| 作者姓名： | 张红梅 乐晓华 徐六妹 李丽雄 王火生 周伯平 陈玉丙 |
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| 作者单位： | 1. 深圳市东湖医院,肝病研究所,广东,深圳,518020
2. 吉林大学第二院放疗科,长春,130021 |
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| 摘 要： | 目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体，并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求，应用在线miRNA设计工具http：//maidesigner．invitrogen．com／maiexpress／，针对大鼠TIMP1基因（GenBank：U06179）的598位点设计、合成Oligo DNA，退火形成双链DNA后，与载体pcDNA TM^6．2-GW／EmGFP-miR连接，转化Top10感受态细胞，构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体。经PCR扩增及测序鉴定正确后，以脂质体Lipofectimine TM^2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6，24、48、72h后收集细胞，应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况。结果经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体正确；将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6，48h即可见TIMP1 mRNA表达量下降，72h检测不到TIMP1 mRNA的表达，而未转染组及转染pLacZ-miR／GFP（阴性对照）组未见此改变。结论成功构建大鼠TIMP1 miR—NA慢病毒RNAi载体pTIMP1-miR／GFP；pTIMP1-miR／GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6TIMP1基因沉默。提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默，为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础。
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| 关 键 词： | 基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP1 大鼠肝星状细胞株HSC-T6 肝纤维化 RNA干扰 慢病毒RNAi载体 大鼠 miRNA 病毒 RNAi 载体 肝星状细胞株 表达量 影响 研究 gene expression Impact lentiviral vector Construction 肝纤维化模型 应用治疗 干扰技术 关键因子 形成过程 基因沉默 阴性对照 |
| 文章编号： | 1007-4287（2008）01-0038-04 |
| 收稿时间： | 2007-04-14 |
| 修稿时间： | 2007年4月14日 |
Construction of lentiviral vector of the rnai mirna of RAT-TIMP1-GENE and whose Impact on the TIMP1 gene expression in HSC.T6 cells |
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| ZHANG Hong-mei, LE Xiao-hua, XU Liu-mei,et al..Construction of lentiviral vector of the rnai mirna of RAT-TIMP1-GENE and whose Impact on the TIMP1 gene expression in HSC.T6 cells[J].Chinese Journal of Laboratory Diagnosis,2008,12(1):38-41. |
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| Authors: | ZHANG Hong-mei LE Xiao-hua XU Liu-mei |
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| Institution: | ZHANG Hong-mei, LE Xiao-hua, XU Liu-mei, et al. |
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