| 摘 要： | 目的目前研究表明,超顺磁性氧化铁颗粒标记干细胞后,可进行心肌内移植磁共振活体示踪,但由于标记效率较低,加上大动物心电门控和呼吸控制效果较差,磁共振图像质量差强人意。本实验采用SHU555A(Resovist)纳米微粒标记猪骨髓间充质干细胞(MSCs),对标记方法和标记细胞磁共振成像进行方法学优化,以期提高磁共振成像质量。方法①细胞磁标记方法的优化:分离培养猪MSCs。将SHU555A和非特异性转染剂PLL以1:0．03的比例用无血清的DMEM培养液稀释,制成含铁终浓度分别为0、25、50、100和200 g／mL的SHU555A-PLL标记培养液,室温下轻摇混合60 min,形成SHU555A-PLL复合物,标记猪MSCs 24 h以确定最佳标记浓度;然后以该浓度与猪MSCs分别共孵育0、2、4、8、16、24和48 h,以确定最佳标记时间。反映不同条件下标记效率和标记毒性的检测指标包括:普鲁士蓝染色、细胞电子显微镜检查、细胞铁浓度测定(原子吸收分光光度仪)、锥虫蓝排除试验、细胞毒性和增殖活性测定(CCK-8试验)。②标记细胞心脏移植的磁共振成像优化:开胸结扎前降支建立猪急性心肌梗死模型10头,每头直视下经心外膜向左室梗死交界区心肌内缓慢注射(1-10)×106细胞,每点150μL,共3点。对植入猪心肌内的标记细胞进行体内磁共振成像。比较T2 * WI-Flash2d(快速小角度反转梯度回波序列)、T2*WI-MAP和钆喷酸葡胺静脉注射后T2*WI-Flash2d等3种成像方法的图像质量。结果①MSCs平均含铁量随着培养液中SHU555A浓度的增加而升高;但SHU555A浓度增加到100 g／mL时,细胞活力开始下降(P<0．01),并可见较多蓝染铁颗粒粘附于细胞表面甚至游离于细胞外;进一步增加到200 g／mL时,细胞存活率和细胞活力均下降(P分别<0．05、0．01)。MSCs平均含铁量随着共孵育时间的增加而相应升高:但共孵育48 h时,细胞存活率降低(P<0．05)。电子显微镜检查显示, 50:1．5μg／mL SHU555A-PLL 24 h标记方案在细胞和亚细胞水平未发现氧化铁的毒性作用。该方案体外磁共振T2*WI-GRE检测闽值为7．5×104细胞。②标记细胞心肌内移植磁共振成像发现,T2*WI-Flash2d图像平均评分为(2．00±0．82)分;72*WI-Map成像、钆喷酸葡胺注射后T2*WI-Flash2d图像平均评分均为(2．60±0．84)分,明显优于前者(P=0．024)。结论50:1．5μg／mL SHU555A-PLL培养液与猪MSCs共孵育24 h是合适的标记方案。1．5 T磁共振成像仪72*WI-Flash2df笋列可对植入心脏的磁标细胞进行活体显像,T2*I-Map成像、钆喷酸葡胺注射后T2*WI-Flash2d成像可显著提高图像质量。
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