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RNA干扰技术抑制EC-109细胞survivin基因表达及其促凋亡研究
引用本文:程碧珍,李瑶琛,林树勇,李康生. RNA干扰技术抑制EC-109细胞survivin基因表达及其促凋亡研究[J]. 医学争鸣, 2007, 28(1): 75-78
作者姓名:程碧珍  李瑶琛  林树勇  李康生
作者单位:汕头大学医学院,微生物学与免疫学教研室,广东,汕头,515041;汕头大学医学院,第一附属医院,广东,汕头,515041
摘    要:目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡. 方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点收集转染细胞,利用流式细胞术及基因组DNA凋亡检测试剂盒,观察siRNA抑制survivin基因表达后诱导细胞凋亡的情况. 结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达46.70%. 半定量RT-PCR检测到pSIREN/S质粒在EC-109细胞内对survivin基因的转录抑制率为74.04%;蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pSIREN/S的EC-109细胞survivin蛋白表达量仅为正常组的41.64%,而对照质粒pSIREN/CN对survivin基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用. 经pSIREN/S转染的EC-109细胞基因组DNA出现明显的DNA ladder,流式细胞仪分析结果也显示凋亡细胞为60.78%. 结论:survivin特异性siRNA可明显抑制survivin基因的转录和表达,并能有效地诱导EC-109细胞的凋亡,为下一步在体内利用pSIREN/S重组质粒沉寂survivin基因,促肿瘤细胞的凋亡提供实验基础.

关 键 词:RNA干扰技术  食管肿瘤  survivin基因  EC-109细胞
文章编号:1000-2790(2007)01-0075-04
修稿时间:2006-01-16

Inhibitory effect of RNA interference on survivin gene expression and its apoptosis-inducing effect in EC-109 cells
CHENG Bi-Zhen,LI Yao-Chen,LIN Shu-Yong,LI Kang-Sheng. Inhibitory effect of RNA interference on survivin gene expression and its apoptosis-inducing effect in EC-109 cells[J]. Negative, 2007, 28(1): 75-78
Authors:CHENG Bi-Zhen  LI Yao-Chen  LIN Shu-Yong  LI Kang-Sheng
Affiliation:1 Department of Microbiology and Immunology, 2 First Affiliated Hospital, Medical College, Shantou University, Shantou 515041, China
Abstract:
Keywords:RNA innterference    esophageal neoplasms    survivin gene   EC-109 cell line
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