| 羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒与脂质体介导人可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1的转染比较 |
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| 引用本文： | 江丹,吴强,贾丽丽,宋蓓雯,杜新华.羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒与脂质体介导人可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1的转染比较[J].中华眼底病杂志,2010,26(3). |
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| 作者姓名： | 江丹 吴强 贾丽丽 宋蓓雯 杜新华 |
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| 作者单位： | 1. 上海中医药大学附属龙华医院眼科
2. 上海交通大学附属第六人民医院眼科,200233 |
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| 基金项目： | 上海市科学技术委员会登山计划 |
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| 摘 要： | 目的 比较羧甲基化葡聚糖(CMD)磁性纳米颗粒与脂质体LipofectamineTM2000对人可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1(sFlt-1)第2～4区基因片段的转染率.方法 构建真核表达质粒编码增强型绿色荧光蛋白质粒(pcDNA3.1-EGFP)/sFlt-1(2～4),采用酶切、电泳及基因测序鉴定.将实验分为磁颗粒组、脂质体组和未转染对照组进行.转染后24、48 h,倒置相差荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布;流式细胞仪检测细胞绿色荧光表达率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测sFlt-1(2-4)mRNA和蛋白表达;噻唑蓝(MTT)比色法观测细胞生长情况,计算各组细胞相对增长率(RGR);Hoeehst细胞核染色法观察各组细胞凋亡情况.结果 重组质粒pcDNA3.1/sFlt-1(2～4)酶切产物在琼脂糖凝胶电泳时出现大小为915碱基对的条带.流式细胞仪检测发现,磁颗粒组平均转染率为45%,脂质体组平均转染率21%;二者比较,差异有统计学意义(t=2.541,P<0.05).RT-PCR和Western blot观察发现,转染后48 h磁颗粒组细胞sFlt-1(2～4)mRNA和蛋白表达均明显高于脂质体组(t=2.454,2.398;P值均<0.05).转染后24、48 h,磁颗粒组RGR与未转染对照组间差异无统计学意义(t=1.436,P>0.05),脂质体组RGR与未转染对照组及磁颗粒组间差异均有统计学意义(t=2.412,2.545,P值均<0.05);磁颗粒组细胞凋亡率与未转染对照组间差异无统计学意义(t=1.436,P>0.05),与脂质体组间差异有统计学意义(t=2.236,P<0.05).结论 CMD磁性颗粒较脂质体LipofeetamineTM2000可获得更高的sFlt-1(2～4)基因片段转染率.
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| 关 键 词： | 葡聚糖类 纳米粒子 脂质体 基因转移技术 血管内皮生长因子受体1 |
Comparison of the transfection effects on soluble fins-like tyrosine kinase receptor-1 gene mediated by carboxymethylated dextran coated nanoparticle and lipofectamineTM 2000 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Glucans Nanoparticles Liposomes Gene transfer techniques Vascular endothelial growth factor receptor-1 |
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