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| ROCK-Ⅱ基因shRNA质粒表达载体的构建与鉴定 | |
| 作者姓名： | 李晓江 白云深 杨有庚 |
| 作者单位： | 吉林大学第二医院骨科,吉林,长春,130041 |
| 摘 要： | 目的 构建表达Rho激酶(ROCK)-Ⅱ特异性siRNA的重组质粒.方法 按照Elbashir等设计原则和siRNA表达载体的要求,利用Ambion公司在线siRNA Tatget finder软件,设计带有BamH I、Bbs I酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA,并将其克隆入载体pGPU6/GFP/Neo,构建成ROCK-Ⅱ特异siRNA重组质粒,然后进行酶切鉴定及基因测序.结果 设计的shRNA成功克隆入载体pGPU6/GFP/Neo,构建成ROCK-Ⅱ特异siRNA重组质粒,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的 基因序列准确无误.结论 重组质粒构建成功,为今后体外或体内研究ROCK基因在脊髓损伤后的功能修复提供了一种有效的方法. |
| 关 键 词： | 载体构建 RNA干扰 ROCK(Rho激酶) |
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