| 摘 要： | 目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear, PEI)介导的高效瞬时转染条件, 提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney, HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率。方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)/pcDNA3.1+, 通过瞬时转染的方式将质粒转入HEK293F细胞中进行表达。对转染试剂PEI与重组质粒的比例以及收获时间进行优化, 通过倒置显微镜观察、SDS-PAGE和流式细胞仪检测目标蛋白的表达量, 确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件。采用优化后的条件在T500摇瓶(工作体积120 ml)中进行扩大表达。结果构建的重组质粒EGFP/pcDNA3.1+序列正确, 在重组质粒浓度为3.0 μg/ml、DNA∶PEI为2∶1、转染后24 h添加终浓度为2 mmol/L的丙戊酸钠、转染后4 d收获条件下, 目的蛋白的表达量最高。此条件也适用于放大培养体积至T500的瞬时转染。结论优化了一种快速有效的基于PEI的瞬时转染方法来高水...
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