| 小鼠IL-17A-GST融合蛋白的克隆表达 |
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| 引用本文： | 张阳,张晋渝,石云,赵卓,刘晓斐,庄园,张卫军,郭刚,邹全明.小鼠IL-17A-GST融合蛋白的克隆表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(8). |
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| 作者姓名： | 张阳 张晋渝 石云 赵卓 刘晓斐 庄园 张卫军 郭刚 邹全明 |
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| 作者单位： | 第三军医大学检验系临床微生物学与免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，重庆市自然科学基金计划项目 |
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| 摘 要： | 目的: 构建含有小鼠IL-17A(mIL-17A)基因的重组原核表达载体,获得高效表达mIL-17A 的基因工程菌,以及较高产量的mIL-17A蛋白.方法:以PMA 活化后小鼠脾脏单个核细胞的总RNA 逆转录合成的cDNA为模板,PCR 法扩增mIL-17A的编码序列,并分别亚克隆至pMD18-T 载体和原核表达载体pGEX-4T-1 中,经酶切和DNA测序鉴定后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果:PCR 产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是mIL-17A,DNA 序列测定进一步证实与GenBank 报道的序列完全一致成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1/mIL-17A,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约40 000的具有可溶性的融合蛋白,且Western blot证实确为目的蛋白结论: 成功构建了基因重组体pGEX-4T-1/mIL-17A;并制备出可溶性IL-17A-GST融合蛋白. E3),IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果:PCR 产物大小及其双酶 鉴定均证明所克隆的基因是mIL-17A,DNA 序列测定进一步证实与GenBank 报道的序列完全一致成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1/mIL-17A,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约40 000的具有可溶性的融合蛋白,且Western blot证实确为目的蛋白结论: 成功构建了基因重组体pGEX-4T-1/mIL-17A;并制备出
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| 关 键 词： | 白细胞介素-17A GST融合蛋白 可溶性表达 |
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