| 转化生长因子β/骨形成蛋白应答元件表达质粒的构建及功能检测 |
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| 引用本文： | 胡青婷,沈旭,张凯,贾岽,艾文兵,张艳琼,柳长柏,吴江锋.转化生长因子β/骨形成蛋白应答元件表达质粒的构建及功能检测[J].解剖学杂志,2014,37(5). |
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| 作者姓名： | 胡青婷 沈旭 张凯 贾岽 艾文兵 张艳琼 柳长柏 吴江锋 |
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| 作者单位： | 1. 三峡大学医学院,宜昌 443002;三峡大学分子生物学研究所,宜昌 443002
2. 三峡大学医学院,宜昌 443002;三峡大学分子生物学研究所,宜昌 443002;三峡大学第二临床医学院,宜昌 443002
3. 三峡大学第二临床医学院,宜昌,443002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，湖北省卫生厅科研指导性项目 |
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| 摘 要： | 目的:为了确认与转化生长因子β/骨形成蛋白(TGF-β/BMP)信号通路相关的转录因子,建立靶向治疗肝纤维化的筛选平台.方法:通过分子生物学技术设计、合成TGF-β/BMP应答元件(TRE/BRE),构建真核表达质粒pGLuc-TRE-MiniTK、pGLuc(BRE)2-MiniTK和pGLuc(GCCG) 9-MiniTK.通过脂质体将pGLuc-TRE-MiniTK转染到小鼠成纤维细胞L929内,并采用TGF-β的持续活化型受体CA-ALK5激活TGF-β信号;将p-GLuc(BRE)2-MiniTK和pGLuc-(GCCG)9-MiniTK分别转染到大鼠肝星状细胞HSC-T6内,用BMP的持续活化型受体CA-ALK3激活BMP信号.然后,通过荧光检测培养细胞上清中的GLuc表达量,以此确认TGF-β/BMP应答元件的功能.结果:酶切鉴定和测序分析证实TRE、(BRE)2及(GCCG)9的碱基序列、插入方向和阅读框架正确.荧光素酶检测显示TRE和(BRE)2的荧光素酶GLuc大量表达,而(GCCG)9的荧光素酶GLuc表达不理想.结论:真核表达质粒pGLuc-TRE-MiniTK和pGLuc-(BRE) 2-MiniTK具备筛选与TGF-β/BMP信号通路相关转录因子的功能.
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| 关 键 词： | 转化生长因子β应答元件 骨形成蛋白应答元件 肝纤维化 |
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