| 酪氨酸蛋白激酶配体EphrinB2蛋白靶向miRNA表达 载体构建及其沉默效率评价 |
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| 引用本文： | 潘佳忻，张,锋，吴新民，张志文.酪氨酸蛋白激酶配体EphrinB2蛋白靶向miRNA表达 载体构建及其沉默效率评价[J].中国新药杂志,2010,19(13):1184-1188. |
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| 作者姓名： | 潘佳忻，张 锋，吴新民，张志文 |
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| 作者单位： | （北京大学医学部北京大学第一医院麻醉科，北京100034） |
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| 摘 要： | 目的：针对大鼠的Efnb2基因序列（目的蛋白EphrinB2），构建特异性干扰微小RNA(miRNA)及其表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR，并检测其对Efnb2基因的干扰作用。方法：根据NM001107328基因序列设计并合成4对miRNA oligo；将4对oligo退火成双链。然后用载体构建试剂盒进行重组克隆，将4对双链miRNA oligo分别插入到miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR中，构建4个miRNA表达质粒，通过脂质体2000将已经构建好的pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR干扰质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中，通过qPCR检测Efnb2基因表达水平的变化。结果：DNA测序分析证明Efnb2基因的miRNA载体构建正确，RT-PCR结果表明Efnb2基因的表达水平明显降低。结论：成功地构建了针对Efnb2基因的miRNA载体，转染细胞后对Efnb2基因沉默。
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| 关 键 词： | 微小RNA RNA干扰 基因治疗 酪氨酸蛋白激酶配体 EphrinB2 大鼠嗜铬细胞瘤细胞株PC12 |
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