联合抑制PI3K和MEK的活性可协同抑制顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖

目的研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)特异性抑制剂AZD6244对顺铂耐药卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP)增殖的影响。方法 (5、10、20、40、80)μmol/L LY294002、(1、2、4、8、16)μmol/L AZD6244单独及联合作用于SKOV3/DDP细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50)及合用指数(CI);根据结果确定联合用药的浓度,将实验分为对照组、LY294002组(5μmol/L)、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY294002 5μmol/L+AZD6244 7μmol/L);作用48 h后,采用MTT法确定细胞生长曲线,计算细胞倍增时间;平板克隆检测集落形成能力;annexinⅤ-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并测定细胞周期;Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)、AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及激活型caspase-3蛋白的水平。结果 LY294002及AZD6244均可抑制SKOV3/DDP细胞增殖,两药联合作用IC50明显降低,此时CI1,具有协同作用;联合组细胞的生长速度较单独作用组及对照组慢;倍增时间延长;集落形成数减少(P0.01);FCM显示联合组凋亡率增高,阻滞于G1期的细胞增多,S期明显减少(P0.05);Western blot结果显示,AKT、ERK1/2蛋白表达水平在各组间无明显差异(P0.05);LY294002组p-AKT水平降低,p-ERK水平增高;AZD6244组p-ERK水平降低,p-AKT水平增高;联合组p-AKT、p-ERK水平均降低,cyclin D1表达较其余各组低,激活型caspase-3较其余各组高。结论 PI3K抑制剂LY294002联合MEK抑制剂AZD6244通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期进展协同抑制SKOV3/DDP细胞生长。