Ficolin 3的表达、纯化及其对RAW264.7巨噬细胞的活化作用 |
| |
引用本文: | 郭江涛,曹旭晴,王志军.Ficolin 3的表达、纯化及其对RAW264.7巨噬细胞的活化作用[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(7). |
| |
作者姓名: | 郭江涛 曹旭晴 王志军 |
| |
作者单位: | 宁夏人民医院肾内科;宁夏人民医院神经内科;宁夏医科大学总医院放射科; |
| |
基金项目: | 宁夏自然科学基金(NZ11157);宁夏科技攻关项目(2009032) |
| |
摘 要: | 目的构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系RAW264.7活化中的作用。方法从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pET22b-ficolin 3后,在大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化His-ficolin 3。以His蛋白为对照,利用流式细胞术检测不同浓度可溶性His-ficolin 3对RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞能力的影响,利用ELISA检测His-ficolin 3对RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影响。结果酶切鉴定获得预期目的片段,测序证实重组质粒pET22b-ficolin 3构建成功。SDS-PAGE提示相对分子质量(Mr)33 000处有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表达,His柱纯化后产物纯度在90%以上。Western blot法检测证实纯化产物为His-ficolin 3。和His蛋白相比,His-ficolin 3对RAW264.7细胞的吞噬能力具有剂量依赖性,即His-ficolin3浓度越高,吞噬能力越强;此外,His-ficolin3能显著诱导RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性细胞因子。结论成功构建了pETb-Ficolin 3重组载体并获得了纯度为90%以上的His-ficolin 3。His-ficolin 3能够显著促进巨噬细胞RAW264.7的活化。
|
关 键 词: | pETb 原核表达 RAW.巨噬细胞 细胞吞噬作用 |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|