血清型2型猪链球菌烯醇化酶参与猪链球菌抗吞噬作用 |
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引用本文: | 霍春月,纪颖,任丽丽,张静,孔军伶.血清型2型猪链球菌烯醇化酶参与猪链球菌抗吞噬作用[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(11). |
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作者姓名: | 霍春月 纪颖 任丽丽 张静 孔军伶 |
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作者单位: | 首都医科大学燕京医学院; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30870091) |
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摘 要: | 目的制备高纯度的猪链球菌烯醇化酶(SsEno)重组蛋白并通过抗体封闭实验评价SsEno对猪链球菌抗吞噬能力的影响,鉴定其与人纤维蛋白原(hFg)结合的活性。方法构建hisSsEno重组表达质粒,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE分析蛋白表达情况,镍柱亲和纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。用hisSsEno免疫兔制备其高滴度的抗血清并通过人全血杀伤模型评价Eno对猪链球菌抗吞噬能力的影响。采用ELISA和Far-Western blot法鉴定hisSsEno与hFg结合活性。结果成功构建了His标签蛋白原核表达质粒并获得了高纯度的hisSsEno重组表达蛋白。SsEno免疫的抗血清能显著降低强致病的猪链球菌05ZYH33在人全血中的存活能力。hisSsEno能特异地与hFg结合。结论获得了hisSsEno重组表达蛋白,通过抗体阻封和全血杀伤模型发现SsEno是猪链球菌潜在的抗吞噬因子,且hisSsEno能特异性结合hFg。
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关 键 词: | 血清型型猪链球菌 烯醇化酶 抗吞噬 人纤维蛋白原 相互作用 |
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