| S100A9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定 |
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| 引用本文： | 刘洋洋,李晓玲,左威,迟健,柳刚,孙龙钦,姜俊义,刘莹.S100A9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(9). |
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| 作者姓名： | 刘洋洋 李晓玲 左威 迟健 柳刚 孙龙钦 姜俊义 刘莹 |
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| 作者单位： | 蛋白质组学国家重点实验室;北京蛋白质组研究中心抗体工程研究室; |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)(2011CB915502);国家高技术研究发展计划(863)(2012AA020201);蛋白质组学国家重点实验室(SKLP Y200907) |
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| 摘 要： | 目的制备S100A9重组蛋白及其单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特异性鉴定。方法以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-S100A9和pET-32a-S100A9。融合蛋白在大肠杆菌中表达,纯化后以His-S100A9作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA和Western blot法鉴定筛选抗体。挑取杂交瘤细胞株制备腹水并纯化,采用Western blot法和间接免疫荧光染色鉴定mAb的特异性。结果 GST-S100A9和His-S100A9融合蛋白均成功构建表达。共筛选到抗S100A9杂交瘤细胞18株,其中15株在Western blot检测中与重组蛋白呈强阳性反应,3株呈弱阳性反应。2株可识别肝癌组织间隙液中的S100A9天然蛋白。结论成功地制备出多株抗S100A9的mAb。
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| 关 键 词： | SA 单克隆抗体 杂交瘤 细胞融合 |
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