表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定 |
| |
引用本文: | 乔卿华,吕欣,雷迎峰,杨敬,姚敏,韩佩君,党品香,赵海卫,翁代慧,尹文.表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(11). |
| |
作者姓名: | 乔卿华 吕欣 雷迎峰 杨敬 姚敏 韩佩君 党品香 赵海卫 翁代慧 尹文 |
| |
作者单位: | 第四军医大学基础医学部微生物学教研室;中国人民解放军第152医院检验科; |
| |
基金项目: | 陕西省科技统筹创新工程计划(2014TCL03-08);中国肝炎防治基金会天晴肝病研究基金(CFHPC20132043) |
| |
摘 要: | 目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。
|
关 键 词: | 丙型肝炎病毒 核心蛋白 肝癌细胞株 慢病毒 稳定表达 |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|