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印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤细胞的放射增敏作用及机制研究
引用本文:李懿,王运来,刘均,李继聪,陈宏.印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤细胞的放射增敏作用及机制研究[J].中华放射医学与防护杂志,2014,34(4):267-270,278.
作者姓名:李懿  王运来  刘均  李继聪  陈宏
作者单位:650032 昆明, 成都军区昆明总医院肿瘤科;解放军总医院放疗科;650032 昆明, 成都军区昆明总医院肿瘤科;650032 昆明, 成都军区昆明总医院肿瘤科;650032 昆明, 成都军区昆明总医院肿瘤科
基金项目:国家自然科学基金(81201756);云南省自然科学基金(2011FZ316,2012FD090)
摘    要:目的 探讨印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤放射敏感性的影响及相关分子机制。方法 通过基因转染技术,将真核表达质粒pEGFP-C3-PHLDA2导入骨肉瘤U2OS细胞,经G418持续筛选获得稳定高表达PHLDA2蛋白的亚克隆细胞。实验分为3组:不转染的空白对照组,U2OS;稳定转染pEGFP-C3质粒的阴性对照组,U2OS-neo;pEGFP-C3-PHLDA2质粒的稳定转染组,U2OS-PHLDA2。采用CKK8比色法测定4和8 Gy X射线照射后细胞的增殖活性;克隆形成实验观察0~8 Gy照射后细胞的存活能力;Annexin V/PI染色法检测8 Gy照射后的细胞凋亡;Western blot测定蛋白的表达变化。建立人骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,观察10 Gy照射后PHLDA2基因的体内增敏效应。结果 经筛选获得的骨肉瘤亚克隆U2OS-PHLDA2细胞中PHLDA2蛋白表达上调(t=13.73,16.28, P<0.05)。与U2OS和U2OS-neo组相比,PHLDA2高表达组在4和8 Gy的增殖能力明显降低(t=5.00~8.23,P<0.05),2~8 Gy的克隆形成能力明显降低(t=-2.52~-1.26,P<0.05);同时照后裸鼠移植瘤的生长抑制作用显著提高(t=3.27、2.91,P<0.05)。8 Gy照后,PHLDA2高表达组的凋亡率为(17.97±1.69)%,高于U2OS组的(6.47±1.01)%和U2OS-neo组的(7.15±0.96)%(t=10.11、9.61,P<0.05);同时Caspase-3活性明显提高(t=11.26、10.72,P<0.05)。结论 外源性PHDLA2基因在U2OS细胞中稳定过表达能够提高骨肉瘤对X射线的敏感性,其机制可能是通过增强Caspase-3的活性、促进射线诱导的细胞凋亡作用实现的。

关 键 词:骨肉瘤  印记基因  PHLDA2  放射敏感性  细胞凋亡
收稿时间:2013/10/31 0:00:00

Effects of the overexpression imprinted gene PHLDA2 on radiosensitivity of osteosarcoma
Li Yi,Wang Yunlai,Liu Jun,Li Jicong and Chen Hong.Effects of the overexpression imprinted gene PHLDA2 on radiosensitivity of osteosarcoma[J].Chinese Journal of Radiological Medicine and Protection,2014,34(4):267-270,278.
Authors:Li Yi  Wang Yunlai  Liu Jun  Li Jicong and Chen Hong
Institution:Department of Oncology, Kunming General Hospital of People's Liberation Army, Kunming 650032, China;Department of Oncology, Kunming General Hospital of People's Liberation Army, Kunming 650032, China;Department of Oncology, Kunming General Hospital of People's Liberation Army, Kunming 650032, China;Department of Oncology, Kunming General Hospital of People's Liberation Army, Kunming 650032, China
Abstract:
Keywords:Osteosarcoma  Imprinted gene  PHLDA2  Radiosensitivity  Cell apoptosis
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