蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化蓝氏贾第鞭毛虫的α-4贾第素蛋白。方法经RT—PCR获得a-4贾第素基因片段，经双酶切连入原核表达载体pET-28a（＋），构建成为重组表达载体pET-28a（＋）-α-4，并转化大肠杆菌Rosetta（DE3）。IPTG诱导后，收集菌体，裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测，并用Ni—NTA亲和层析柱纯化融合蛋白。结果成功构建了原核表达载体pET-28a（＋）-α-4，经IPTG诱导后，在大肠杆菌中高效表达，目的蛋白以包涵体形式存在；SDS-PAGE及Western blot分析显示，在相对分子量约34kD的位置出现目的蛋白条带，与理论值相符；经Ni—NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-4贾第素融合蛋白。结论成功克隆、表达并纯化了α-4贾第素蛋白，为α-4贾第素的细胞定位及功能研究提供了必要条件。