滋补肝肾方全方及拆方对黑素细胞氧化损伤致凋亡的影响

目的观察滋补肝肾方中滋补肝肾药、活血药、祛风药及全方对氧化损伤后的黑素细胞活性、凋亡率、线粒体膜电位及释放凋亡蛋白的调节作用,探讨滋补肝肾方的作用机制。方法以B16黑素细胞为研究对象,用过氧化氢刺激造成黑素细胞氧化损伤模型。根据组方规律将滋补肝肾方中的药物拆分为滋补肝肾组、活血组、祛风组,采用冻干粉溶液作用细胞。MTT比色法观察各组黑素细胞的生长抑制;流式细胞仪技术分析DNA含量,确定凋亡细胞所占比例;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)检测线粒体膜电位变化;Western blot法检测凋亡蛋白。结果滋补肝肾方全方组(200μg/mL、100μg/mL)、活血组(100μg/mL)可升高氧化损伤后细胞活性,以全方组作用最为明显。全方组细胞凋亡率低,在保护黑素细胞免受氧化损伤方面比其他组效果更明显。与对照组相比,50μg/mL全方组、200μg/mL滋补肝肾组、50μg/mL滋补肝肾组Bcl-2蛋白表达升高(P0.05),说明全方组、滋补肝肾组抗凋亡作用明显。Capase 9、Capase 3、CytC模型组与各药物组蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。25μg/mL祛风组、12.5μg/mL祛风组AIF蛋白与模型组相比差异有统计学意义(P0.05)。50μg/mL全方组、50μg/mL滋补肝肾组、50μg/mL活血组、25μg/mL祛风组、12.5μg/mL祛风组Bax蛋白与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。除全方组、滋补肝肾组外,其余各药物组Smac蛋白表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论滋补肝肾方及其拆方可抑制黑素细胞氧化损伤,可能通过线粒体通路发生作用,提示白癜风临床治疗当补血活血、滋补肝肾、祛风共用。