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脐血来源树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表型鉴定及其特异性杀伤效应
引用本文:王丹辉,徐鹏,魏军剑,刘玉侠,王敏,张新. 脐血来源树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表型鉴定及其特异性杀伤效应[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11(11): 2017-2020
作者姓名:王丹辉  徐鹏  魏军剑  刘玉侠  王敏  张新
作者单位:1. 吉林大学第一医院骨科,吉林省长春市,130021
2. 长春市纺织厂(银龙集团)医院骨科,吉林省长春市,130021
3. 吉林省肿瘤医院肿瘤研究所,吉林省长春市,130021
4. 通辽市开鲁县麦新中心卫生院外科,内蒙古自治区通辽市,028413
摘    要:目的:观察从脐血中提取的树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表面表型特点及其所激活的细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性。方法:实验于2003-10/2005-12在解放军军事医学院兽医研究所完成。①脐血来源于长春市妇产医院足月顺产的非高危妊娠产妇,要求无急慢性感染及血液系统疾病,产妇及其家属均签署知情同意书。热休克蛋白70由本室制备纯化。人骨肉瘤细胞Saos-2(北京肿瘤研究所,批号222RXB013538)。②封闭式采集脐带血,体外分离脐血单个核细胞,调整浓度为1×109L-1,接种于24孔细胞培养板,每孔均加入100μg/L人重组粒-巨噬细胞集落刺激因子、50μg/L白细胞介素4、10μg/L肿瘤坏死因子α。培养14d后,鉴定细胞表面CD1a、HLA-DR的百分率。③用含胎牛血清的IMDM培养Saos-2骨肉瘤细胞至对数生长期,胰酶消化后调整细胞数为5×107L-1。集传20代生长的Saos-2,冻融2次,低渗震荡,离心,上清用盐酸调pH至7.0,过滤后即为肿瘤抗原肽,与热休克蛋白70体外结合。④另取脐血40mL,分离T淋巴细胞,诱导分化至第4天,加入热休克蛋白70-肿瘤抗原肽100μL,促使T淋巴细胞活化为细胞毒T淋巴细胞。⑤效应细胞(细胞毒T淋巴细胞)与靶细胞(Saos-2)按效靶比50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1梯度,四甲基偶氮唑盐法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性。结果:①细胞形态学观察:细胞因子诱导后第3天,镜下脐血细胞呈均匀散布的细胞聚体,胞体拉长;第7天可见不明显突起;第14天出现具有典型树枝状突起的树突状细胞。②细胞因子诱导后脐血单核细胞表面表型鉴定结果:经细胞因子诱导后,脐血单核细胞CD1a与HLA-DR表达率均较诱导前明显升高[0,(18.43±3.26)%;(4.03±1.66)%,(59.69±8.47)%;P均<0.01]。③细胞毒T淋巴细胞杀伤活性检测结果:培养72h后,细胞毒T淋巴细胞与靶细胞Saos-2效靶比为50∶1时可杀伤决大部分肿瘤细胞,杀伤率为(97.50±11.24)%,效靶比从50∶1至3.125∶1可使靶细胞Saos-2生长呈梯度受到不同程度的抑制。单纯的树突状细胞及未经激活的T淋巴细胞对Saos-2细胞仅有微弱的生长抑制作用。结论:脐血来源的树突状细胞经过热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物负载致敏后,激活的细胞毒T淋巴细胞对人骨肉瘤细胞Saos-2具有极强的杀伤能力。

关 键 词:树突细胞  肽类  抗原呈递  热休克蛋白质70  放射免疫疗法
文章编号:1673-8225(2007)11-02017-04
收稿时间:2006-09-26
修稿时间:2007-01-18

Cell phenotype identification of cord blood-derived dendritic cells loaded with heat shock protein 70-peptide complex and the specific potential inhibiting effect on osteosarcoma
Wang DH,Xu P,Wei JJ,Liu YX,Wang M,Zhang X. Cell phenotype identification of cord blood-derived dendritic cells loaded with heat shock protein 70-peptide complex and the specific potential inhibiting effect on osteosarcoma[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2007, 11(11): 2017-2020
Authors:Wang DH  Xu P  Wei JJ  Liu YX  Wang M  Zhang X
Abstract:
Keywords:
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