全反式维甲酸促大鼠胚胎神经干细胞向神经元分化中β连环蛋白的表达及意义

目的:观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)在体外促进大鼠胚胎神经干细胞(neural stemcells,NSCs)分化为神经元过程中β连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在NSCs分化中的意义。方法:取第3代大鼠胚胎NSCs体外培养,实验组加入1.0μmol/L ATRA诱导,分别于干预后3、5、7、9d采用免疫细胞化学染色、实时荧光定量RT-PCR、Western blot检测β-catenin的表达及变化情况,对照组不加ATRA培养,于相应时间点进行相同检测。比较两组各时间点β-catenin的表达量。结果:免疫细胞化学染色示实验组在培养3～7d时β-catenin表达逐渐增强(P0.05),7d与9d差异无统计学意义(P0.05),实验组各时间点与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);实时荧光定量RT-PCR检测示3～7d时β-catenin mRNA相对表达量逐渐增加(P0.05),7d与9d差异无统计学意义(P0.05),实验组各时间点与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);Western blot印迹检测实验组细胞内β-catenin总蛋白、胞浆内β-catenin蛋白、胞核内β-catenin蛋白3～7d时表达量逐渐增加(P0.05),7d与9d差异无统计学意义(P0.05)。细胞内β-catenin的总蛋白变化趋势与RT-PCR结果相似,且胞浆内β-catenin和胞核内β-catenin的蛋白表达量随时间增加而增加。结论:NSCs分化为神经元的过程中,Wnt/β-catenin信号途径被激活,且β-catenin在细胞浆及细胞核内表达量均增多,与NSCs的分化成正调控,在细胞分化达到平衡状态时(7d～9d)表达量不再增加,表明ATRA促NSCs向神经元的分化与经典的Wnt/β-catenin信号途径有关。