| 摘 要： | 目的探讨不同的HBX截断突变体对TRAIL-R1(DR4)和TRAIL-R2(DR5)表达的影响,以及DR4和DR5在HBX截断突变体增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法构建HBX的1~120 aa(C端截断)、51~120 aa(C端和N端共同截断)和51~155 aa(N端截断)的突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3;在HepG2和Huh-7肝癌细胞中,Real-time PCR和Western blot检测稳定转染HBX不同突变体的DR4和DR5的表达;Western blot检测RNA小干扰载体(DR4-siRNA和DR5-siRNA)的HBX突变体的DR4和DR5表达情况,流式细胞术检测TRAIL(200 ng/ml)诱导的肝癌细胞凋亡情况。结果经PCR扩增和双酶切鉴定,3种突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3重组质粒构建成功,测序检测目的基因序列正确;Real-time PCR和Western blot表明,HBX1能显著增加2种肝癌细胞系中的DR4和DR5基因和蛋白的表达;而HBX2和HBX3对DR4和DR5基因和蛋白的表达无显著影响;在Hep G2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞中,与对照组相比,DR4-siRNA和DR5-siRNA显著降低了DR4、DR5的表达;流式细胞术检测结果显示HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率较对照组细胞均显著提高;RNA小干扰抑制DR4和DR5的表达后,HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率下降。结论成功构建了3种不同HBX突变体的真核表达载体;HBX基因C端截断(1~120 aa)的突变体能够上调DR4和DR5的表达,且能够上调DR4和DR5的表达促进TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡。
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