| 小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化 |
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| 引用本文： | 胡水旺,孙明晶,夏高晓,邓鹏,姜勇.小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化[J].解放军医学杂志,2010,35(10). |
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| 作者姓名： | 胡水旺 孙明晶 夏高晓 邓鹏 姜勇 |
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| 作者单位： | 南方医科大学病理生理学教研室、广东省蛋白质组学重点实验室,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展(973)计划项目，长江学者和创新团队发展计划，国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金重点项目，国家自然科学基金，广东省科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建小鼠固醇载体蛋白2(SCP-2)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化获得具有活性的融合蛋白,为进一步研究SCP-2的生物学功能提供基础.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到鼠SCP-2编码序列,然后将该编码序列克隆到带有His标记的载体pET14b上,重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性,然后切取分子量正确的条带用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定.结果 重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确.融合蛋白表达纯化后获得了分子量约59kD的融合蛋白,符合预期大小,并经质谱分析证明该融合蛋白的表达正确.结论 成功构建了带His标签的SCP-2原核表达载体,并成功表达及纯化出该融合蛋白,为深入研究SCP-2的相关生物学功能提供了一个重要的工具.
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| 关 键 词： | 固醇载体蛋白类 克隆 生物 基因表达 |
Construction,expression and purification of a prokaryotic expression vector for sterol carrier protein 2 |
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| HU Shui-wang,SUN Ming-jing,XIA Gao-xiao,DENG Peng,JIANG Yong.Construction,expression and purification of a prokaryotic expression vector for sterol carrier protein 2[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2010,35(10). |
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| Authors: | HU Shui-wang SUN Ming-jing XIA Gao-xiao DENG Peng JIANG Yong |
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