骨髓间充质干细胞对CD117^＋心脏干细胞分化过程中转化生长因子βⅢ型受体表达的影响

背景：骨髓间充质干细胞能够促进心肌细胞、血管生成。减轻心肌重构、改善心功能。但其旁分泌作用能否能够通过影响转化生长因子βⅢ型受体促进CD117^＋心脏干细胞的分化尚不清楚。目的：观察骨髓间充质干细胞对CD117^＋心脏干细胞分化过程中转化生长因子3型受体表达的影响。设计、时间及地点：细胞学体外对比观察，于2008-02/2009-02在新华医院完成。材料：新生大鼠，体质量5-8g，用于心脏干细胞分离培养：4周龄SD大鼠，体质量200-250g，用于骨髓间充质干细胞培养。方法：分离大鼠心肌组织进行植块培养，体外磁珠分离培养大鼠心脏干细胞，免疫荧光鉴定其表型为CD117^＋。将获得的CD117^＋心脏干细胞吹打制成单细胞悬液，无血清同步化24h，PBS冲洗3次，加入DMEM／F12培养基，接种至破明胶包被的6孔板。实验分为对照组和共培养组，对照组用心肌球培养液诱导分化的心脏干细胞。共培养组用Transwell小室避免细胞融合建立心脏干细胞与骨髓间充质干细胞共培养体系。主要观察指标：①倒置显微镜下观察心脏干细胞生长情况。（2）Westernblot检测CD117^＋心脏干细胞向心肌细胞系分化过程中培养第1，3，5，7天心肌钙蛋白T、缝隙连接蛋白43、转化生长因子βⅢ型受体和smad2及其磷酸化程度的改变。结果：①植块培养和磁珠分离法结合分离出CD117心脏干细胞，传代后心脏干细胞分散生长，细胞略小于普通心肌细胞。②诱导分化后第5，7天，共培养组心肌钙蛋白T和缝隙连接蛋白43的表达高于对照组（P〈0．05）；诱导分化后第1—7天，转化生长因子βⅢ型受体的表达均高于对照组（P〈0．05）：同时，磷酸化smad2／smad2的值也高于对照组（P〈0．05）。结论：骨髓间充质干细胞旁分泌作用能够促进CD117^＋心脏干细胞内心肌钙蛋白T，缝隙连接蛋白43和转化生长因子βⅢ型受体的表达，并提高了smad2蛋白的磷酸化程度。