| 抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 吕海丽,姬晓南,冯丽亚,张瑜,高向东. 抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及活性鉴定[J]. 中国药科大学学报, 2012, 43(5): 460-465 |
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| 作者姓名： | 吕海丽 姬晓南 冯丽亚 张瑜 高向东 |
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| 作者单位： | 中国药科大学生命科学与技术学院;中国药科大学生命科学与技术学院;中国药科大学生命科学与技术学院;中国药科大学生命科学与技术学院;中国药科大学生命科学与技术学院 |
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| 基金项目： | 江苏省“青蓝工程”资助项目(2010) |
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| 摘 要： | 将抗甲胎蛋白单链抗体(scFv-AFP)基因克隆至载体pET32a,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3),在不同的诱导剂浓度、诱导温度和时间下诱导pET32a-scFv-AFP表达,SDS-PAGE分析表明37℃培养4 h时加入0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5 h为最适表达条件,目的蛋白表达量约为总蛋白的50%,其产物以包涵体形式存在。利用稀释法和透析法对包涵体复性,复性率为37.38%,活性蛋白产量达到200 mg/L。竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,当scFv-AFP与亲本单抗浓度比为16∶1,竞争ELISA抑制率达到54.13%,说明scFv-AFP具有较好的抗原结合特异性。该研究为scFv-AFP的获得与抗体的进一步应用改造奠定了基础。
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| 关 键 词： | 甲胎蛋白 单链抗体 表达 E.coliBL21(DE3) pET32a |
Optimization of expression conditions of scFv-AFP and its immunologic activity |
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| Lü Hai-li,JI Xiao-nan,FENG Li-ya,ZHANG Yu,GAO Xiang-dong. Optimization of expression conditions of scFv-AFP and its immunologic activity[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2012, 43(5): 460-465 |
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| Authors: | Lü Hai-li JI Xiao-nan FENG Li-ya ZHANG Yu GAO Xiang-dong |
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| Affiliation: | School of Life Science & Technology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China |
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