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| GST-hSesn2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达 | |
| 作者单位： | ;1.中国医科大学附属盛京医院骨科;2.中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室 |
| 摘 要： | 目的构建GST-h Sesn 2融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hSesn2基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hSesn2,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-h Sesn2,并用Western blot方法证实了GST-h Sesn2融合蛋白在原核细胞大肠埃希菌中阳性表达。结论 GST-h Sesn2原核表达载体成功构建为进一步纯化Sesn2及研究其结构与功能提供了前提基础。 |
| 关 键 词： | Sesn2 原核表达 融合蛋白 |
The construction and expression of GST-h Sesn2 fusion protein expression vectors in prokaryotic cells |
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