| 应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒e抗原调节基因 |
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| 引用本文： | 王建军,徐志强,成军,刘妍,杨倩,纪冬,党晓燕,王春花.应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒e抗原调节基因[J].胃肠病学和肝病学杂志,2004,13(1):13-16. |
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| 作者姓名： | 王建军 徐志强 成军 刘妍 杨倩 纪冬 党晓燕 王春花 |
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| 作者单位： | 100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 |
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| 摘 要： | 目的 筛选与克隆HBeAg激活基因，了解其在体内的凋节功能线索。方法 以HBeAg表达质粒pcDNA3．1(-)-HBeAg转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为eDNA，经RsaⅠ酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染人肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果 成功构建人HBeAg激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到40个阳性克隆，进行菌落PCR分析，均得到200～800bp插入片段。对插入片段测序，并通过生物信息学分析获得其全长基因序列，结果共获得12种编码基因，包括11种已知基因和1种未知基因。结论 筛选到的cDNA全长序列，包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及物质代谢密切相关的蛋白编码基因，推测了HBeAg在体内可能存在的调控机制的线索，尚需进一步的实验证明。
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| 关 键 词： | 抑制性消减杂交技术 乙型肝炎病毒 e抗原 聚合酶链反应 cDNA消减文库 生物信息学 |
| 修稿时间： | 2003年12月10 |
Screening of the target genes transactivated by hepatitis B virus e antigen using suppression suhtractive hybridization technique |
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| WANG Jianjun,XU Zhiqiang,CHENG Jun,et al Gene Therapy Research Center.Screening of the target genes transactivated by hepatitis B virus e antigen using suppression suhtractive hybridization technique[J].Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology,2004,13(1):13-16. |
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| Authors: | WANG Jianjun XU Zhiqiang CHENG Jun Gene Therapy Research Center |
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| Institution: | WANG Jianjun,XU Zhiqiang,CHENG Jun,et al Gene Therapy Research Center,Institute of Infectious Diseases,The 302 Hospital of PLA,100 Xisihuanzhong Road,Beijing 100039,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus e antigen Gene |
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