| 结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价 |
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| 作者姓名： | 王雪梅 王英 薛玉芹 陈勇 陶志勇 夏惠 唐洁 方强 |
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| 作者单位： | 王雪梅 (蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030)； 王英 (蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030)； 薛玉芹 (蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030)； 陈勇 (蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠,233030)； 陶志勇 (蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030)； 夏惠 (蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030)； 唐洁 (蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030蚌埠医学院免疫学教研室,安徽蚌埠233030)； 方强 (蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(项目编号：30600518),安徽省高等学校省级自然科学研究项目(项目编号：KJ2013A185),安徽省高等学校省级自然科学研究项目(KJ2011Z248)Supported,by,National,Natural,Science,Foundation,of,China(项目编号：30600518) |
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| 摘 要： | 目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗 细胞免疫 体液免疫 |
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