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| 沉默调节蛋白6-谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的克隆表达 | |
| 引用本文： | 夏天,刘建湘,姚景宏,吴太鼎,刘子建,杨述华. 沉默调节蛋白6-谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的克隆表达[J]. 中华实验外科杂志, 2012, 29(2) |
| 作者姓名： | 夏天 刘建湘 姚景宏 吴太鼎 刘子建 杨述华 |
| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科, 武汉,430022 2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科, 武汉,430022 3. 华中科技大学同济医学院解剖学系 |
| 摘 要： | 目的 构建含有人沉默调节蛋白6(hSIRT6)基因的重组原核表达载体,获得高效表达hSIRT6蛋白的基因工程菌,以及较高产量的SIRT6蛋白.方法 取205 ng HEK293细胞总RNA逆转录后合成的cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hSIRT6的编码序列,并克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组的质粒pGEX-4T-3/SIRT6;将重组质粒pGEX-4T-3/SIRT6转化感受态细菌BL21( DE3),在含100 mg/L氨苄西林的LB平板37℃培养过夜,以pGEX-4T-3空载体作为对照,在相同条件下转化并异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)蛋白.产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.结果 PCR产物大小及双酶切鉴定证明所克隆的基因是hSIRT6,DNA测序进一步证实与GeneBank序列完全一致.获得高表达及纯化的SIRT6-GST融合蛋白,该可溶蛋白的相对分子质量为72×103,经Western blot鉴定证实为目的蛋白.结论 成功构建了基因重组体pGEX-4T-3/hSIRT6,并制备出可溶性SIRT6-GST融合蛋白. |
| 关 键 词： | 沉默调节蛋白6 谷胱甘肽-S-转移酶 融合蛋白 纯化 |
Expression and purification of sirtuin6-glutathione S-transferase fusion protein |
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| XIA Tian , LIU Jian-xiang , YAO Jing-hong , WU Tai-ding , LIU Zi-jian , YANG Shu-hua. Expression and purification of sirtuin6-glutathione S-transferase fusion protein[J]. Chinese Journal of Experimental Surgery, 2012, 29(2) | |
| Authors: | XIA Tian LIU Jian-xiang YAO Jing-hong WU Tai-ding LIU Zi-jian YANG Shu-hua |
| Abstract: | |
| Keywords: | Sirtuin6 Glutathione-s-transferase Fusion protein Purification |
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