| 人GRP94基因慢病毒载体构建及稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌HeLa细胞株筛选及鉴定 |
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| 引用本文： | 杨娅楠,王 媛,左志宇,王鑫廷,杨 洁.人GRP94基因慢病毒载体构建及稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌HeLa细胞株筛选及鉴定[J].天津医科大学学报,2017,0(4):290-294. |
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| 作者姓名： | 杨娅楠 王 媛 左志宇 王鑫廷 杨 洁 |
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| 作者单位： | ( 天津医科大学免疫学系，天津 300070) |
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| 摘 要： | 目的:构建人葡萄糖调节蛋白 94(GRP94)基因慢病毒载体，筛选稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌细胞株，筛选GRP94结合蛋白，为探讨GRP94对宫颈癌的调控作用提供细胞模型。方法:采用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增GRP94基因片段，连接到慢病毒载体pLVX-IRES-Hyg中，获得重组载体。瞬时转染293T细胞，采用Western blotting 法检测GRP94蛋白表达量。pLVX-FLAG-GRP94重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞，获得重组慢病毒。以慢病毒感染HeLa细胞，筛选并鉴定稳定表达GRP94蛋白的细胞株。用稳定表达FLAG-GRP94的HeLa细胞株，银染后利用质谱筛选结合蛋白，并经免疫共沉淀验证。结果:重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确。HeLa细胞经慢病毒感染，药物筛选后获得的稳定表达株中GRP94蛋白表达量高于野生型HeLa细胞(P<0.01)。成功钓取出一种与肿瘤发生发展密切相关的SND1蛋白。结论:成功构建了GRP94基因慢病毒载体pLVX-FLAG-GRP94，并筛选出稳定表达GRP94蛋白的HeLa细胞株，为进一步明确肿瘤的发生、发展机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 葡萄糖调节蛋白94 慢病毒载体 HeLa SND1 |
Construction of human GRP94 lentivirus vector and its application in screening human cervical cancer cell line HeLa for stable expression |
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| YANG Ya-nan,WANG Yuan,ZUO Zhi-yu,WANG Xin-ting,YANG Jie.Construction of human GRP94 lentivirus vector and its application in screening human cervical cancer cell line HeLa for stable expression[J].Journal of Tianjin Medical University,2017,0(4):290-294. |
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| Authors: | YANG Ya-nan WANG Yuan ZUO Zhi-yu WANG Xin-ting YANG Jie |
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| Institution: | (Department of Immunology，Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GRP94 lentiviral vector HeLa SND1 |
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