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| Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选与初步鉴定 | |
| 引用本文： | 申咏梅,杨晓春,董宁征,白霞.Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选与初步鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(2). |
| 作者姓名： | 申咏梅 杨晓春 董宁征 白霞 |
| 作者单位： | 1. 苏州大学附属第二医院,放免中心,江苏,苏州,215006;苏州大学附属第二医院,检验教研室,江苏,苏州,215006 2. 苏州大学附属第二医院,磁共振室,江苏,苏州,215004 3. 江苏省血液研究所,苏州大学附属第一医院,江苏,苏州,215006 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省自然科学基金 |
| 摘 要： | 目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定.方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA.利用RT-PCR扩增抗体к轻链和重链Fd片段,经Sac Ⅰ/Xba Ⅰ和Xho Ⅰ/Spe Ⅰ双酶切,依次克降入噬菌体载体pComb3H-SS的相应酶切位点,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库.以Daudi细胞为抗原对抗体库进行6轮"吸附-洗脱-扩增"筛选,并通过ELISA法对随机挑选的克降进行抗原结合活性测定,获得的阳性克隆进一步做DNA序列测定、在大肠杆菌XL1-Blue中进行可溶性表达,并用Western blot对表达产物的特异性作了鉴定.结果:构建了容量为3.13 × 107的抗人B细胞淋巴瘤Daudi细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Daudi细胞系特异性识别结合的4株阳性克隆.氨基酸序列分析结果显示:阳性克隆的重链、轻链可变区序列分别与基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链、轻链可变区序列有80%～94%和88%～95%同源性.阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达,Western blot结果表明所获得的可溶性表达产物可与Daudi细胞膜抗原特异性结合.结论:成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Daudi细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础. |
| 关 键 词： | B细胞淋巴瘤 噬菌体抗体库 Daudi细胞系 pComb3H-SS载体 |
Oaudi Fab Generation, screening and preliminary identification of specific Fab phage an-tibody library against Daudi cell strain |
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| SHEN Yong-mei,YANG Xiao-chun,DONG Ning-zheng,BAI Xia.Oaudi Fab Generation, screening and preliminary identification of specific Fab phage an-tibody library against Daudi cell strain[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2009,25(2). | |
| Authors: | SHEN Yong-mei YANG Xiao-chun DONG Ning-zheng BAI Xia |
| Abstract: | |
| Keywords: | Fab |
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