单克隆抗体G250修饰的基因载体携带Ki-67小干扰RNA作用Hela细胞体外实验研究

目的：评价携带肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA（siRNA）的表达质粒pSliencer-Ki-67对人宫颈癌细胞株Hela细胞的基因治疗功效。方法将构建的携带肿瘤增殖基因Ki-67 siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67，用G250单克隆抗体（G250 mAb）与非病毒基因载体聚乙烯亚胺（PEI）偶联制成新型基因转染载体感染Hela细胞以及人肝癌细胞株HepG2细胞、小鼠胚胎成纤维细胞株NIH3T3细胞，通过四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测其抑制肿瘤细胞增殖的效能，应用膜联蛋白Ⅴ-碘化丙啶（AnnexinⅤ-PI）法、4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）法检测pSliencer-Ki-67对细胞早、晚期凋亡的影响，并应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质印迹（Western blotting）法检测Ki-67 mRNA和Ki-67蛋白的表达。结果在RT-PCR与Western blotting检测中，用G250 mAb-PEI/pSliencer-Ki-67转染细胞后，Ki-67 mRNA、Ki-67蛋白表达较对照组明显降低；MTT法检测发现，G250 mAb/PEI-pSliencer-Ki-67对Hela细胞（G250抗原阳性）有明显抑制作用，而对HepG2细胞、NIH3T3细胞（G250抗原阴性）无明显抑制作用。通过荧光显微镜检测也发现，在早、晚期凋亡实验中，G250 mAb/PEI-pSliencer-Ki-67转染Hela细胞后，可诱导细胞凋亡，但对正常细胞的凋亡诱导作用非常弱。结论pSliencer-Ki-67能够诱导Hela细胞（G250抗原阳性）凋亡，而对HepG2细胞及NIH3T3细胞（G250抗原阴性）无明显抑制作用，pSliencer-Ki-67在Hela细胞的基因治疗方面有潜在应用前景。

Experimental study of monoclonal antibody G250 modified genetic vector with Ki-67 siRNA on Hela cell in vitro