过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡的实验观察

目的 探讨过氧化氢（H₂O₂）体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡。 方法 体外培养细粒棘球蚴原头节,实验分为2组,即RPMI 1640组及RPMI 1640添加谷氨酰胺组。分别用不同浓度的H₂O₂诱导,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术（TUNEL 法）检测凋亡细胞;用过氧化物酶标记链酶卵白素（SP）染色-免疫组化法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）以及FAS基因蛋白(跨膜蛋白Fas)表达情况。表达产物用二氨基联苯胺（DAB）显色,苏木素复染。TUNEL反应以细胞核黄染者为阳性细胞,caspase-1和caspase-3以细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,Fas以细胞膜和细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,无黄染者为阴性细胞。根据每个原头节中阳性细胞数所占百分比,对原头节阳性表达程度分为4个级别,即原头节中阳性细胞数＜5% 为“-”,5%～25% 为“+”,26%～50%为“++”,＞50%为“+++”。实验重复2次。各组均设空白对照组。 结果 RPMI 1640组,1 mmol/L H₂O₂诱导12 h,查见典型的TUNEL反应阳性细胞;诱导4 h,caspase-1表达86.6%为 “+ ～ ++”,caspase-3 表达77.8%为 “+ ～ ++”;诱导8 h,caspase-1表达 86.6%为 “+ ～ ++”,caspase-3表达 80.0%为 “+ ～ ++”。均比对照组明显增加（P＜0.05）。而5 mmol/L H₂O₂ 诱导4 h,caspase-1表达93.0%为 “++ ～ +++”,caspase-3表达 89.5%为 “+ ～ ++”;诱导8 h,caspase-1表达“++ ～ +++”降为53.2%,caspase-3 表达“+ ～ ++”降为48.4% 且阴性表达为46.8%,降低显著(P＜0.01)。添加谷氨酰胺（终浓度为2 mmol/L）组,5 mmol/L H₂O₂ 诱导8 h,caspase-3 100%为 “++ ～ +++” 高度阳性表达。与平行的RPMI 1640组（caspase-3 表达“++ ～ +++”为32.2%, 且阴性表达为46.8%）相比,变化明显。原头节在对照组和诱导组均可见Fas阳性表达细胞,RPMI 1640组5 mmol/L H₂O₂诱导4 h,“+ ～ ++”表达为53.0%,对照组为20.0%;RPMI 1640添加谷氨酰胺组5 mmol/L H₂O₂诱导8 h,“+ ～ ++”表达为88.7%,对照组为71.4%,诱导后均有所增加（P＜0.05）。 结论 H₂O₂可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡。

In vitro Observation on the Apoptosis Induced by H_2O_2 in Protoscolex of Echinococcus granulosus

Objective To explore the apoptosis induced by hydrogen peroxide ( H2O2) in protoscolex of Echinococcus granulosus. Methods Protoscoleces were cultured in vitro, and used for the experiment in 2 groups: RPMI 1640 medium and RPMI 1640 medium added with glutamine. They were then treated with different concentrations of H2O2 to induce apoptosis. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling assay (TUNEL) was employed to observe the apoptosis. Protein expression of caspase-1, caspase-3 an...