| 由BL21DE3pET28C-rPAL-1-cDNA高效表达具有酶活性的苯丙氨酸脱氨酶 |
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| 引用本文： | 蔡朱男,余应年,陈星若,袁丽芳.由BL21DE3pET28C-rPAL-1-cDNA高效表达具有酶活性的苯丙氨酸脱氨酶[J].中国药理学与毒理学杂志,2000,14(3):211-215. |
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| 作者姓名： | 蔡朱男 余应年 陈星若 袁丽芳 |
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| 作者单位： | [1]浙江大学医学院病理生物学教研室 [2]中国医学科学院基础医学研究所遗传室 |
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| 摘 要： | 为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径, 本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶(PAL) cDNA的重组表达质粒,并用它转化大肠杆菌BL21DE3获得工程菌BL21DE3pET28C-rPAL-1-cDNA. 经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导后, 通过SDS-PAGE及微型蛋白双向电泳, 证明表达的目的蛋白的分子量为78.6 ku, 主要存在于破碎菌体的沉积物中(以包涵体形式存在). 按Zucker法测定PAL酶活性,并进行酶动力学实验. 测得表达蛋白的酶比活性为462 nmol·g-1·min-1, Km, vmax分别为0.50 mmol·L-1和3.05 nmol·min-1. 结果证明所建立BL21DE3pET28C-rPAL-1-cDNA大肠杆菌菌株能高效表达有活性的PAL.
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| 关 键 词： | 脱氨酶类 苯丙氨酸脱氨酶 苯丙氨酸 酶学 |
| 收稿时间： | 2000-1-3 |
| 修稿时间： | 2000-01-03 |
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