| 改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用 |
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| 引用本文： | 张莉君,王先良,张迟,孙晞,徐顺清. 改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用[J]. 检验医学, 2006, 21(6): 633-636 |
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| 作者姓名： | 张莉君 王先良 张迟 孙晞 徐顺清 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境与健康教育部重点实验室,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境与健康教育部重点实验室,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境与健康教育部重点实验室,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境与健康教育部重点实验室,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境与健康教育部重点实验室,湖北,武汉,430030 |
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| 摘 要： | 目的改进聚合酶链反应（PCR），并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7，提取基因组DNA，利用亚硫酸氢盐测序法，用常规、降落及改进PCR分别扩增，比较扩增效果，PCR产物纯化回收后，TA克隆入载体pGEM-T，转化大肠杆菌（E．coli DH5α），筛选阳性克降，经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒，测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比，扩增效率增高，二聚体及非特异性扩增减少；测序结果显示，MCF-7细胞基因组DNA中，RASSFIA基因启动子CpG岛是高甲基化的，E-cadherin基因启动子CpG岛末呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性，更适用于基因甲基化状态的检测，并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。
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| 关 键 词： | 甲基化 聚合酶链反应 E-cadherin RASSF1A |
| 文章编号： | 1001-2087(2006)06-0633-04 |
| 修稿时间： | 2006-03-13 |
Improvement and application of polymerase chain reaction in analysis of methylation of CpG island in promoter of anti-oncogene |
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| ZHANG Lijun,WANG Xianliang,ZHANG Chi,SUN Xi,XU Shunqing. Improvement and application of polymerase chain reaction in analysis of methylation of CpG island in promoter of anti-oncogene[J]. Laboratory Medicine, 2006, 21(6): 633-636 |
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| Authors: | ZHANG Lijun WANG Xianliang ZHANG Chi SUN Xi XU Shunqing |
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| Keywords: | E-cadherin RASSF1A |
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