| 摘 要： | ![]()
目的采用血清饥饿法诱导K562细胞凋亡,比较K562细胞与人白血病骨髓间充质干细胞(LMSC)共培养前后,K562细胞凋亡的变化,并进一步探讨其可能涉及到的信号转导通路(PI3K/Akt/Bad),为临床靶向治疗白血病提供依据。方法采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)荧光标记法检测血清饥饿后和与LMSC共培养后K562细胞凋亡的变化。蛋白印迹法检测与LMSC共培养后及加入磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性阻断剂LY294002后,K562细胞中Akt、p-Akt、Bad、p-Bad蛋白的变化。结果 10%胎牛血清(FBS)培养时,K562细胞凋亡率为(4.87±0.09)%,FBS饥饿培养24h后,K562细胞凋亡率为(10.14±0.50)%,较10%FBS培养明显升高(P<0.05)。与LMSC共培养后,K562细胞凋亡率为(7.15±0.06)%,细胞凋亡率较FBS饥饿培养下降(P<0.05)。进一步蛋白印迹法检测发现,K562细胞在单独悬浮培养条件下,即有Akt、p-Akt、Bad、p-Bad蛋白的表达;与LMSC共培养后,p-Akt、p-Bad的表达量显著升高(P<0.05),在共培养体系中加入PI3K特异性抑制剂LY294002后,p-Akt、p-Bad的表达量明显下降(P<0.05);而3组间Akt、Bad蛋白的表达量未见明显变化(P>0.05)。结论①LMSC能够抑制血清饥饿诱导的K562细胞凋亡。②其涉及到的信号转导通路可能为PI3K/Akt/Bad。③PI3K/Akt/Bad可作为白血病靶向治疗的新的作用靶点。
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