| 狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库的构建 |
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| 引用本文： | 李玉萍,罗仁,赵晓山,聂晓莉,李俊.狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库的构建[J].中国组织工程研究与临床康复,2006,10(47):4-7. |
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| 作者姓名： | 李玉萍 罗仁 赵晓山 聂晓莉 李俊 |
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| 作者单位： | 1. 南方医科大学中医药学院,广东省,广州市,510515
2. 广州中医药大学消化内科,广东省,广州市,510405 |
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| 基金项目： | 广东省中医药局资助项目(1050130)~~ |
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| 摘 要： | 目的:采用抑制性消减杂交技术构建汉族人狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库。方法:选择2005-08/10南方医科大学南方医院中医科收治的狼疮性肾炎肾阳虚证患者5例,另选择与上述年龄相匹配的健康正常人5名作为正常对照组。狼疮性肾炎肾阳虚证患者组和正常对照组进行正向和反向消减杂交。采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART(Switch Mechanism At 5 end of RNATemplate)技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaI酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用聚合酶链反应方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建狼疮性肾炎肾阳虚证消减文库。结果:TRIzol一步法抽提的总RNA纯度高(A260/A280nmnm>1.90),用SMART技术扩增微量RNA,扩增产物双链cDNA主要分布在0.5～10kb,基因组cDNA经RsaI内切酶酶切后片段主要集中在200～2000bp。用抑制性消减杂交方法筛选出了狼疮性肾炎肾阳虚证的差异cDNA片段,得到了480个白色克隆,再经聚合酶链反应方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了狼疮性肾炎肾阳虚证的cDNA消减文库。结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆狼疮性肾炎肾阳虚证相关基因奠定了基础。
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| 关 键 词： | 狼疮肾炎 肾阳虚 杂交 基因组文库 |
| 文章编号： | 1671-5926(2006)47-0004-04 |
| 修稿时间： | 2006年7月11日 |
Construction of cDNA substractive library of kidney yang deficiency of lupus nephritis |
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| Li Yu-ping,Luo Ren,Zhao Xiao-shan,Nie Xiao-li,Li Jun.Construction of cDNA substractive library of kidney yang deficiency of lupus nephritis[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2006,10(47):4-7. |
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| Authors: | Li Yu-ping Luo Ren Zhao Xiao-shan Nie Xiao-li Li Jun |
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