去甲斑蝥素对TGF—β1诱导的人近端肾小管细胞上皮细胞转分化及信号蛋白Smad2／3表达的影响

目的探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株（HK－2）上皮细胞间质转分化（epithelial—mesenchymal transition，EMT）以及信号蛋白Smad2／3的影响。方法体外培养HK2细胞，分为对照组、TGF-β1组和去甲斑蝥素组（NCTD组）。对照组为无血清DMEM培养，TGG-β1组为TGF-β1 5ng·mL^-1诱导，NCTD组为不同浓度NCTD（0．5、1．0、2．5μg·mL^-1）与TGF-β1（5ng·mL^-1）共同作用，各组作用时间48h。使用半定量RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮性钙黏附蛋白（Ecadherin）与Smad2、Smad3mRNA表达；采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2／3、p-Smad2／3蛋白质表达。结果与对照组相比，TGF-β1组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显上调（Pd0．05），E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著下调（P〈0．05）；与TGF-β1组相比，NCTD干预组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显下调（P〈0．05），而E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著上调（P〈0．05），且均呈剂量依赖性。与对照组相比，TGF-β1组Smad2、Smad3rnRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达上调（P〈0．05）；与TGF-β1组比较，NCTD干预组Smad2、Smad3mRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达下调（P〈0．05），具有剂量依赖关系。结论去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用，该作用可能与其下调信号蛋白Smad2／3的表达有关。