转录因子STAT1两个亚型STAT1α和STAT1β高表达载体的构建及鉴定

目的：利用高表达载体pLJM1‐EGFP构建并鉴定转录因子STAT1基因的2个亚型STAT1α和STAT1β的过表达重组质粒（简称为pLJM1‐STAT1α和pLJM1‐STAT1β）。方法以大鼠肝脏cDNA 为模板，PCR获取目的片段（即STAT1α和STAT1β）；用AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切pLJM1‐EGFP表达载体和PCR扩增的STAT1α和STAT1β基因片段后，用T4 DNA连接酶连接酶切纯化后的载体及目的基因片段；将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞、挑选阳性克隆，并通过PCR、双酶切和DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pLJM1‐STAT1α和pLJM1‐STAT1β重组载体中分别成功插入了STAT1α和STAT1β基因片段。DNA测序结果表明插入的STAT1α和STAT1β基因片段的序列完全正确。结论成功构建了pLJM1‐STAT1α和pLJM1‐STAT1β高表达重组载体。